O surto de gripe aviária H5N1 em fazendas leiteiras dos EUA levou a uma infecção significativa em animais e humanos
Especialistas em saúde pedem ação imediata para prevenir a potencial transmissão entre humanos. Leituras rápidas: Resumo gerado por IA, revisado pela redação. A gripe aviária H5N1 está se espalhando rapidamente entre as fazendas leiteiras dos EUA desde março de 2024. Mais de 1.000 rebanhos leiteiros foram afetados, com 70 infecções humanas relatadas. O CDC afirma que o risco para o público em geral permanece baixo, mas recomenda precauções.
Especialistas em saúde estão alertando sobre a rápida disseminação do vírus da gripe aviária H5N1 nas fazendas leiteiras dos EUA. Desde março de 2024, o surto afetou mais de 1.000 rebanhos leiteiros em todo o país, resultando em mais de 70 infecções humanas e pelo menos uma morte confirmada.
A Rede Global de Vírus (GVN) alerta que a presença contínua do vírus em mamíferos aumenta o risco de mutações que podem permitir a transmissão entre humanos. A organização enfatiza a urgência de estratégias de vigilância reforçada, testes padronizados e vacinação para animais e trabalhadores rurais.
“Compreender o panorama atual das infecções por H5N1 é fundamental para uma prevenção e resposta eficazes”, afirmou Sten H Vermund, MD, PhD, diretor médico da GVN e reitor da Faculdade de Saúde Pública da USF Health da Universidade do Sul da Flórida, EUA. “A capacidade do vírus de infectar animais e humanos, aliada às recentes alterações genéticas, ressalta a importância da vigilância proativa e de medidas de resposta rápida.”
Apesar do surto, os Centros de Controle e Prevenção de Doenças (CDC) afirmam que o risco para o público em geral permanece baixo. No entanto, eles enfatizam a importância das precauções, especialmente para aqueles em contato próximo com animais infectados.
De acordo com o CDC, a gripe aviária H5 está disseminada em aves selvagens no mundo todo e está causando surtos em aves e vacas leiteiras nos EUA, com vários casos humanos recentes em trabalhadores de laticínios e aves nos EUA.
Embora o risco atual para a saúde pública seja baixo, o CDC está monitorando a situação atentamente e trabalhando com os estados para monitorar pessoas expostas a animais. O CDC está usando seus sistemas de vigilância da gripe para monitorar a atividade da gripe aviária H5 em pessoas.
Efeitos colaterais renais inesperados das vacinas de mRNA contra COVID-19; uma experiência de centro único e uma breve revisão
Mecanismos imunológicos inatos e adaptativos das vacinas contra a COVID-19. Eventos adversos graves associados à vacinação contra SARS-CoV-2: uma revisão sistemática
Mecanismos inmunitários inatos e adaptativos das vacinas COVID-19. Efeitos graves adversos associados à vacinação contra o SARS-CoV-2: uma revisão sistemática
Introdução
A presente revisão concentra-se na estimulação imune inata-adaptativa por vacinas contra a COVID-19, especialmente por vacinas de mRNA-iLNP. Descreve tecnologias de iLNP e mRNA modificado por nucleosídeo, transcrição reversa, sinais inflamatórios associados à reatogenicidade, incluindo a interação vascular mediada pelo fator de crescimento endotelial vascular, induzida por proteínas sistêmica e spike, que mimetizam a persistência da COVID. Por fim, discute-se em detalhes a conexão entre a manifestação de formas graves de reações adversas à vacinação e o mimetismo molecular, a produção de autoanticorpos específicos e o papel de certos adjuvantes vacinais.
Objetivos
Identificar artigos que publiquem informações sobre os efeitos adversos produzidos após a administração das vacinas contra a COVID-19, a fim de demonstrar seu potencial terapêutico no tratamento-prevenção da doença; bem como demonstrar a associação de causalidade e ocorrência temporal.
Metodologia
Revisão sistemática da literatura científica publicada entre julho de 2021 e julho de 2023, que analisa todos os relatos de assinaturas inflamatórias de efeitos adversos graves causados pelas vacinas contra a COVID-19.
Resultados
A revisão sistemática identificou 2033 registros que, após um processo de triagem de acordo com os critérios de inclusão e eliminação de artigos duplicados, trabalhos com problemas metodológicos e trabalhos sem acesso aberto, foram reduzidos a 58 artigos, dos quais 50 artigos são modelos humanos e 2 são modelos celulares.
Conclusão
Os resultados desta revisão sistemática revelam a associação causal e temporal dos vários eventos adversos graves após a administração das vacinas contra a COVID-19 e o “efeito de pico” das vacinas contra a COVID-19 é reconhecido.Introdução
A presente revisão está centrada na estimulação imunológica inata-adaptativa para as vacinas COVID-19, especialmente para as vacinas ARNm-iLNP. Se descrevem as tecnologias iLNP e ARNm modificadas com nucleósidos, a transcrição inversa, os sinais inflamatórios vinculados à reatogenicidade, incluindo a diafonia vascular mediada pelo fator de crescimento vascular endotelial (VEGF), inducida pela proteína pico com efeito sistêmico e, que imita o COVID-persistente. Por último, discute-se detalhadamente a conexão entre a manifestação das formas graves das reações adversas à vacinação e o mimetismo molecular, a produção de autoanticorpos particulares e o papel de certificados auxiliares das vacinas.
Objetivos
identificar os artigos que publicam informações sobre os efeitos adversos produzidos após a administração das vacinas COVID-19 para demonstrar seu potencial terapêutico no tratamento e/ou prevenção da doença; também como evidenciar a associação de causalidade e ocorrência temporal.
Metodologia
Revisão sistemática da literatura científica publicada entre julho de 2021 e julho de 2023, que analisa todos os relatórios sobre empresas inflamatórias de efeitos adversos graves causados pelas vacinas contra a COVID-19.
Resultados
A revisão sistemática permitiu identificar 2.033 registros que, após um processo de criação de acuerdo com critérios de inclusão e eliminação de trabalhos duplicados, trabalhos com problemas metodológicos e trabalhos sem acesso livre são reduzidos a 58 artigos, deles, 50 artigos são modelos humanos e 2 correspondem a modelos celulares.
Conclusão
Os resultados desta revisão revelam a associação causal e temporal dos diferentes efeitos adversos graves posteriores à administração das vacinas COVID-19 e reconhecem o «efeito de pico» das vacinas COVID-19.Introdução
As principais tecnologias de vacinas contra o coronavírus 2 da síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV-2) incluem glicoproteína recombinante, adenovírus enfraquecido/inativado e mRNA encapsulado em nanopartículas lipídicas (LNP) (Pfizer-BioNTech Comirnaty, Moderna Spikevax). 1 , 2 As vacinas de mRNA modificadas por nucleosídeos contra a doença do coronavírus 2019 (COVID-19) são os primeiros produtos de mRNA a serem aprovados pela Food and Drug Administration (FDA) e pela Agência Europeia de Medicamentos (EMA). Os principais componentes dessas vacinas são: mRNA modificado por nucleosídeos, que tem a capacidade de codificar proteínas antigênicas, neste caso a proteína spike (S) do SARS-CoV-2, e nanopartículas lipídicas contendo lipídios ionizáveis (iLNP), que funcionam como um veículo de entrega de mRNA intacto ao citoplasma das células que traduzirão a proteína codificada. 3–5 Essas vacinas de mRNA-iLNP modificadas por nucleosídeos são altamente eficazes na indução de respostas imunes adaptativas específicas de espícula em humanos, especialmente anticorpos neutralizantes para criar imunidade protetora contra a infecção por SARS-CoV-2, bem como promover imunidade humoral por meio de células T e prevenir formas graves de COVID-19. 1 , 3 , 6–8 No entanto, sabemos muito pouco sobre a dinâmica e a estrutura da proteína spike das plataformas de vacinas, como as vias imunes inatas regulam a imunidade adaptativa ou quais respostas imunes são protetoras e quais são dispensáveis.
A presente revisão foca na estimulação imune inata/adaptativa por vacinas contra a COVID-19, especialmente por vacinas mRNA-iLNP. Na primeira parte, definimos o conceito de tecnologias de iLNP e mRNA modificado por nucleosídeos, e fornecemos um estudo detalhado sobre a dinâmica e a estrutura da proteína S das vacinas contra a COVID-19, transcrição reversa, exposição e subsequente disseminação para a linhagem celular e integração no genoma do hospedeiro. Em seguida, os sinais inflamatórios ligados à reatogenicidade, incluindo a interação mediada pelo fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), induzida pela proteína spike com efeito sistêmico e mimetizando a COVID longa. Finalmente, discutimos em detalhes a conexão entre a manifestação de formas graves de reações adversas à vacinação e o mimetismo molecular, a produção de autoanticorpos específicos e o papel de certos adjuvantes vacinais.
Tecnologias de mRNA modificado por nucleosídeos e nanopartículas lipídicas ionizáveis
Vacinas seguras e eficazes devem estimular o sistema imunológico inato de forma a atingir um equilíbrio entre imunogenicidade e reatogenicidade. Elas devem fornecer os sinais necessários para manter e desencadear respostas imunes adaptativas. Isso se refere à capacidade das vacinas de atuar em uma situação específica sem causar efeitos inflamatórios locais e sistêmicos excessivos. 3
Vários fatores devem ser considerados que impedem o uso de mRNA sintético para aplicações biomédicas (vacinais ou terapêuticas), como as propriedades mecânicas e biocompatíveis altamente inflamatórias para o reconhecimento de moléculas de mRNA por sensores inatos em compartimentos subcelulares e a entrega citosólica ineficiente de mRNA in vivo. 3 , 9–11
Primeiramente, é importante destacar a necessidade de selecionar um método de fabricação adaptado ao reconhecimento imunológico inato do mRNA. Karikó et al. (2005) identificaram a expressão de certos ribonucleosídeos modificados que funcionam como sensores imunológicos, discriminando RNA próprio de RNA estranho versus ribonucleosídeos não modificados. Em particular, a substituição da uridina por derivados naturais da uridina (pseudouridina [ψ] e seus derivados) é usada para atenuar a inflamação e facilitar a tradução. As propriedades mecânicas mencionadas são essenciais para que o mRNA mitigue ou escape da detecção pela maioria dos sensores imunológicos e imite suas características microestruturais. Esse avanço tecnológico foi essencial para a criação das vacinas de mRNA aprovadas para a COVID-19. As uridinas são substituídas por N1-metilpseudouridina (m1ψ). 3 , 4 , 12 , 13
Por fim, um requisito fundamental na fabricação de vacinas contra a COVID-19 é a biocompatibilidade. A escolha deve ser baseada na eficiência de entrega do mRNA, biodegradabilidade e tolerabilidade para suportar a manipulação da cultura celular e as atividades biológicas do hospedeiro. As vacinas mRNA-iLNP contra a COVID-19 aprovadas utilizam lipídios ionizáveis (ALC-0315 na vacina Pfizer-BioNTech e SM-102 na vacina Moderna). Os iLNPs compreendem um lipídio conjugado com polietilenoglicol (PEG) que confere estabilidade à plataforma, colesterol, um aminolipídio catiônico “ionizável” e 1,2-diestearoil-sn-glicero-3-fosfocolina. 3 , 14 , 15
A tecnologia iLNP não só permite a entrega de mRNA em células imunes inatas após a vacinação, mas também desempenha um papel especial com forte atividade adjuvante neste tipo de plataforma de vacina. A principal característica do mRNA modificado por nucleosídeo é sua capacidade de não produzir inflamação. As vacinas mRNA-iLNP não são imunosilenciosas, conforme verificado pela forte ativação imune inata e relatos de eventos adversos locais e sistêmicos após a vacinação contra COVID-19 em humanos. 1 , 3 , 12 , 16–53 Isso mudaria nossa compreensão do paradigma atual da vacina de mRNA, de como ela ativa o sistema imunológico inato, e aumentaria a perspectiva de refinar o design para vacinas e tratamentos de mRNA mais eficazes e seguros em um futuro próximo. A vantagem das plataformas mRNA-iLNP é que elas não requerem a adição de adjuvantes para induzir respostas imunes protetoras robustas contra vários patógenos. 1 , 3
É necessário compreender como os componentes do mRNA modificados por nucleosídeos versus os excipientes de iLNP funcionam na resposta imune geral induzida pela nova geração de vacinas de mRNA contra a COVID-19. Como discutiremos a seguir, o principal fator de adjuvanticidade e reatogenicidade das vacinas de mRNA-iLNP é o transportador de iLNP. Ele ativa uma variedade de sinais específicos, incluindo citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias. Por exemplo, fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos (GM-CSF); fator de necrose tumoral (TNF); interferon-gama (IFN-γ); interleucinas (IL): IL-1β, IL-6; quimiocinas CC, por exemplo, ligante de quimiocina do motivo CC 2, 3 e 4 (CCL2, CCL3, CCL4); ligante de quimiocina do motivo CXC: 2 e 10 (CXCL2, CXCL10). 3 , 15,16,54–57
Farmacocinética de vacinas de mRNA-iLNP modificadas com nucleosídeos. Biodistribuição e dinâmica de células imunes inatas após administração de vacinas de mRNA-iLNP.
As vacinas de mRNA-iLNP viajam no corpo de acordo com a via de administração e a formulação de iLNP. A administração intramuscular de vacinas de mRNA da COVID-19 e outras vacinas projetadas de forma semelhante resulta na captação e produção do antígeno codificado no local da inoculação e subsequente drenagem para os linfonodos (LNs). Além disso, a disseminação limitada de mRNA e/ou lipídios foi detectada em outros tecidos não drenantes, como pulmões, fígado, baço e LNs. 3 , 14 , 15 , 54 Verbeke et al. (2022) identificam uma biodistribuição semelhante em vacinas de subunidade de proteína adjuvante. 3 , 58 Outros estudos que mostram menor soropositividade da proteína spike do SARS-CoV-2 no plasma de humanos e camundongos que receberam a vacina BNT162b2 da Pfizer mostram como a proteína spike, ou seu molde de mRNA (mRNA-iLNP ou mRNA associado à célula) pode se espalhar sistemicamente após a inoculação intramuscular. 3 , 15 , 58–60 A Fig. 1 resume os mecanismos das células imunes inatas após a administração de vacinas mRNA-iLNP (biodistribuição e dinâmica).
Figura 1.
Dinâmica e biodistribuição de células imunes inatas após vacinação com mRNA-iLNP. (A) A administração intramuscular de vacinas de mRNA-iLNP modificadas com nucleosídeos leva à inflamação local, recrutamento de neutrófilos, subconjuntos de células dendríticas (DC) e monócitos por meio da produção de quimiocinas e outros mediadores inflamatórios envolvidos no extravasamento de células imunes. (B) Expressão de antígeno. Os mRNA-iLNPs se espalham para os linfonodos e drenam. Biodistribuição, captação celular e captação de proteínas (opsonização), limitadas pelas características de superfície e tamanho das células imunes inatas. (C) Monócitos/macrófagos e DCs estão envolvidos na expressão de antígenos e no priming de células T. (D) Indução da maturação por afinidade. As células T auxiliares foliculares (Tfh) conduzem as células B em reações do centro germinativo (GC) na presença de DCs foliculares. Disfunção na sinalização inflamatória, por exemplo, IL-6 induzida por iLNP na estimulação de respostas de células B Tfh e GC, IFN tipo 1 induz respostas de CTL (linfócitos T citotóxicos). Verbeke et al (2022). 2 , 3 , 15 , 17 , 57
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Proteínas produzidas após a inoculação de mRNA-iLNP aparecem rapidamente. Em estudos pré-clínicos, elas atingem o pico de 4 a 24 horas após a administração da vacina e diminuem progressivamente, variando de vários dias a semanas ou meses. Esse processo dependerá da proteína codificada, da dose de mRNA, da via de administração de mRNA-iLNP e do tipo de iLNP. 3 , 13–15 , 25 , 35 , 43 , 59 , 61 , 62 Essas características não apenas oferecem alta e sustentada disponibilidade de antígeno, mas também favorecem respostas de anticorpos mais robustas, tornando-as suporte para células aderentes e melhoram a sobrevivência da infiltração e diferenciação celular, favorecendo a produção de proteínas da vacinação de mRNA em comparação com outras plataformas de vacinas. Por exemplo, tanto o mRNA codificador de spike quanto a proteína spike são detectáveis 60 dias após a segunda dose de BNT162b2 e mRNA-1273 em humanos vacinados, localizados em centros germinativos axilares (GCs). 1 , 3 , 16 , 25 , 27 , 31 , 38 , 40 , 59 , 63 , 64
Há pouca literatura sobre a dinâmica das interações proteína/iLNP para disseminação linfática e celular, embora seja reconhecido que a opsonização de mRNA-iLNP induz a detecção e captação por receptores de células imunes inatas. As vacinas de mRNA-iLNP modificadas com nucleosídeos induzem respostas de células T auxiliares foliculares (Tfh) e a criação de GCs, essenciais para a geração de autoanticorpos específicos, com alta afinidade e persistência. 3 , 65 Verbeke et al. (2022) relatam uma persistência de mais de 6 meses após a segunda dose de 30μg de mRNA em LNs drenantes em humanos, as células B e Tfh GC resultantes levando à geração de células B maduras de afinidade e células plasmáticas de medula óssea de longa duração. A versatilidade das vacinas de mRNA da COVID-19 em humanos, as vacinas de mRNA da COVID-19 induzem células Tfh circulantes específicas de antígeno, bem como células T CD4+ com polarização T helper 1 (Th1) e células T CD8+ produtoras de IFN-γ que permanecem detectáveis até 6 meses após a vacinação. 1 , 3 , 15 , 66–71 Outro ponto a ser considerado é a forte imunogenicidade associada à decoração de superfície de nanopartículas com PEG que modifica a estrutura topológica para evitar a agregação de nanomateriais e facilitar a distribuição no sistema linfático, retardando os processos de opsonização e sua fagocitose. 3 , 15 , 57 Consequentemente, os lipídios de PEG são dessorvidos dos iLNPs para dar suporte à ligação entre proteínas endógenas e lipídios no espaço extracelular, formando uma “corona” biomolecular ao redor do iLNP, incluindo várias lipoproteínas, imunoglobulinas e fragmentos de complemento abundantes no sangue. 3 , 72–74 Também é possível que os neutrófilos possam competir com outras células imunes pela absorção de vacinas de mRNA-iLNP, internalizando-se eficientemente no local da injeção, mas apresentam codificação fraca da proteína repórter. Em contraste, subconjuntos de monócitos e células dendríticas (DC) absorvem e traduzem melhor o mRNA-iLNP. 3 , 15 , 57 , 75
Nesses estudos, os neutrófilos são dispensáveis para respostas de Tfh e GC de células B em comparação com frequências de monócitos e/ou subconjuntos de DC mieloides e macrófagos que são aumentados em LNs drenantes e expressam um número maior de marcadores coestimulatórios, como CD80 e CD86, em comparação com células em LNs não drenantes contralaterais. 3 , 60 , 76 Os mecanismos de captação de iLNP-mRNA pelo sistema imunológico inato e seus parâmetros físico-químicos, como composição de superfície, morfologia e tamanho dos iLNPs, ainda não são bem compreendidos, o que pode condicionar a farmacocinética dessas vacinas.
Identificação imunológica de mRNA modificado e não modificado por nucleosídeos
Há pouca informação pública sobre os métodos exatos de preparação de RNA (transcrição, proteção e purificação) usados pela Pfizer-BioNTech, Moderna e outras vacinas de RNA, o que torna a pesquisa neste campo difícil. Três categorias são investigadas de detecção imune inata de mRNA sintético, que são: (1) reconhecimento dependente de uridina de várias espécies de RNA, 68 , 77 (2) reconhecimento de RNA de fita dupla (dsRNA), 78–80 e (3) reconhecimento da extremidade 5′ do mRNA se não for devidamente encapsulada. 3 , 81–83 A identificação de RNA contendo uridina está associada ao aumento da expressão de citocinas pró-inflamatórias, particularmente o interferon tipo 1 (IFN-1), que promove ainda mais a expressão de sensores de RNA, causando inibição da expressão de antígeno do mRNA via proteína quinase R (PKR) e 2′,5′-oligoadenilato sintetase (OAS). 3 , 4 A modificação de nucleosídeos é necessária para o sucesso clínico e a ampla implantação dessas vacinas hoje. No entanto, não está claro como a modificação de nucleosídeos por si só induz reações em GCs em comparação ao RNA não modificado. Verbeke et al. (2022) propõem várias hipóteses que não são mutuamente exclusivas: (1) A proteína mRNA modificada é apresentada com parâmetros mais altos e mais longos ao longo do tempo do que o mRNA não modificado. Isso impulsionaria as reações de GC, que são promovidas pela disponibilidade prolongada do antígeno, dando à plataforma melhor cinética, 3 , 64 (2) a principal diferença entre mRNA modificado e não modificado não é (apenas) a expressão geral da proteína, mas também a expressão diferencial em principais tipos de células apresentadoras de antígenos (monócitos, macrófagos e DC). Esses tipos de células podem ser especialmente sensíveis aos efeitos inibidores da tradução do mRNA não modificado devido à maior expressão de sensores de RNA, por exemplo, genes TLR7/8, dificultando uma via chave de preparação de células T: apresentação direta de antígenos traduzidos para células T CD4+ e CD8+, 3 , 13 , 54 , 75 , 84 (3) a disfunção da citocina gerada pelo mRNA-iLNP modificado produziria maior reatogenicidade, condicionando as respostas de GC em comparação às respostas induzidas pelo mRNA-iLNP não modificado. 3
O mRNA não modificado também pode induzir a expressão de proteínas e reações de anticorpos neutralizantes, promovendo assim forte expressão de antígenos e imunogenicidade. 3 , 11 Essa teoria comprova a diminuição da inflamação causada pela uridina após a administração de mRNA. No entanto, a probabilidade de produzir um mRNA imunosilencioso é baixa; nem todas as uridinas podem ser removidas da sequência de mRNA. A alternativa poderia ser a remoção parcial da uridina, 1 , 3 , 6 , 17 o que explicaria as diferenças na imunogenicidade e reatogenicidade entre as vacinas contra a COVID-19.
Além disso, o dsRNA (RNA indesejado) está envolvido no reconhecimento imunológico inato “deletério”. A transcrição in vitro (IVT) pela RNA polimerase T7 produz o RNA desejado, mas também um conjunto de espécies de RNA indesejadas, incluindo transcrições curtas abortivas. Também produz RNAs antisense transcritos da extremidade sem promotor do molde de DNA. 3 , 85 Isso poderia impulsionar a formação de dsRNA, induzindo uma potente resposta inflamatória e bloqueio translacional por meio do reconhecimento de vários receptores intracelulares: PKR, OAS, proteína 5 associada à diferenciação de melanoma (MDA-5), receptor Toll-like endosômico 3 (TLR3), gene I do receptor citosólico induzível por ácido retinoico (RIG-1), laboratório de genética e fisiologia 2 (LGP-2), proteína de sinalização antiviral mitocondrial (MAVS), helicase DEAH-box 33 (Homo sapiens, humano [DHX33]), etc., iniciam uma resposta de interferon ao RNA de fita simples. 3 , 12 , 13 , 15 , 78 , 86 Os sensores de DsRNA desempenham um papel essencial no bloqueio translacional, estes são os sensores citosólicos induzíveis por IFN OAS e PKR. Estruturas dupla fita secundárias e terciárias também se formam com base na sequência do mRNA. 3 Pode-se argumentar que a preparação da vacina de mRNA envolve a destruição de qualquer mRNA terapêutico. Essas respostas imunes inatas deletérias podem ser reduzidas quimicamente por dois métodos: primeiro, como discutido acima, a inclusão de nucleosídeos modificados, como ψ, m1ψ e 5-metilcitidina, para reduzir a ativação dos sensores de PKR e OAS; e, segundo, a remoção de dsRNA do mRNA do IVT por outro tratamento químico conhecido como purificação. 3 , 12 , 13 Por fim, a estratégia de encapsulamento cotranscricional 5′ impacta a traduzibilidade e a ativação imune do mRNA do IVT. 3 , 83
O uso de uridinas modificadas é agora reconhecido como um aspecto fundamental da eficácia das vacinas de mRNA contra a COVID-19 utilizadas pela Pfizer-BioNTech e Moderna. Infelizmente, tanto a capacidade inflamatória do componente de mRNA quanto sua tradução são alteradas por outros fatores.
Atividade de adjuvantes de vacinas. Assinatura inflamatória semelhante à da COVID longa. Detecção imunológica inata de nanopartículas lipídicas ionizáveis (iLNP).
Os iLNPs funcionam como agentes de entrega; tanto os iLNPs vazios quanto os complexos mRNA-iLNP atuam como adjuvantes. O componente lipídico ionizável é necessário para o efeito adjuvante; isoladamente, eles não induzem respostas robustas de anticorpos. É importante ressaltar que as vacinas proteicas mRNA-iLNP e iLNP adjuvantadas induzem respostas imunes humorais e celulares semelhantes, muito mais intensas, em células B Tfh e GC. 3 , 13 , 15 , 16 , 65 Começa a surgir uma compreensão da potente atividade adjuvante dos iLNPs e do ambiente inflamatório que eles estimulam. Após a imunização, nos LNs drenantes, tanto os mRNA-iLNPs modificados por nucleosídeos quanto os iLNPs vazios ou os iLNPs compostos de RNA não codificador estimulam a produção de várias quimiocinas com motivos CC e CXC (CXCL1, CXCL2, CXCL5, CXCL10, CCL3, CCL4) e citocinas IL-1β, IL-6, fator inibitório de leucemia (LIF) e GM-CSF. 3 , 16 , 57 A produção rápida, eficiente e potente desses sinais inflamatórios explica a indução de células Tfh e células B GC, bem como a infiltração de células imunes nos tecidos injetados. 3 , 56
Dados disponíveis sobre ativação imune inata em humanos após administração de mRNA-iLNP são limitados, entretanto, os estudos publicados até o momento são consistentes com relatos anteriores em animais. Eles indicam uma assinatura inflamatória semelhante no soro de camundongos após vacinação com BNT162b2: CXCL10, CCL4, IL-6, interferon alfa e gama (IFN-α, IFN-γ). 54 Li et al. (2022) destacam como as assinaturas de IFN-I estimuladas pela vacina e de genes estimulados por IFN (ISG) em vários tipos de células, incluindo monócitos, macrófagos, DCs, células natural killer (NK), atingem o pico no dia 1 e retornam aos níveis basais no dia 7, enquanto as células NK e as células T exibem um aumento contínuo na expressão de genes associados ao ciclo celular e à transcrição (analisados pelo perfil transcricional de célula única em LNs drenantes). Seis horas após a administração de uma segunda dose da vacina, o IFN-γ sérico é 8,6 vezes maior, proveniente principalmente de células CD4+ e CD8+, em comparação com 6 horas após a primeira dose, quando a maior parte do IFN-γ é derivada de células NK. 3 , 54 Não está claro qual componente da vacina mRNA-iLNP pode induzir IFNs tipo 1. Eles afirmam que a sinalização de IFN-γ ativa células apresentadoras de antígeno, mas, nessa condição, as células dendríticas plasmocitoides produzem IFN-α apenas quando expostas a mRNA-iLNP e não a LNPs vazios, apoiando a teoria de que o componente mRNA pode ser responsável pela indução de IFN tipo I. 75
Uma concentração mais alta de IFN-γ é geralmente observada, ou seja, uma disfunção imunológica geral após a vacinação, consistente com relatos de efeitos adversos após vacinações de mRNA contra COVID-19 aprovadas, principalmente para reações sistêmicas, e teoriza-se que a ativação aumentada de células T e células mieloides resulta em comunicação cruzada entre linfócitos e células mieloides que aumenta sua capacidade de resposta a encontros subsequentes com vacinas e/ou infecção por COVID-19. 2 , 3 , 31 , 54 , 74 , 86–91 Sugere-se que as vacinas de mRNA-iLNP têm efeitos de aprimoramento persistentes na imunidade treinada (células mieloides). 3 , 60 , 91 , 92 Pode haver diferenças importantes dependentes de espécies em respostas inflamatórias que precisam ser consideradas ao testar vacinas em modelos animais, incluindo reatogenicidade, febre e indução de outras citocinas inflamatórias estimuladas por mRNA-iLNP. Células mononucleares do sangue periférico humano (PBMCs) tratadas in vitro com mRNA-iLNPs modificados por m1ψ formulados com liberação de lipídios SM-102 IL-β, IL-6, TNF, CCL5, fator de crescimento endotelial vascular (VEGF-A), GM-CSF e outras moléculas foram detectadas, e pesquisas são necessárias nesta área. 3 , 15 , 55 Plant-Hately et al. (2022) observam a estimulação de basófilos na geração e liberação de histamina dentro do sistema vascular. 50 , 57
As vias de sinalização imune inata implicadas no efeito adjuvante do iLNP são: (1) fosfolipídios oxidados ou produtos lipídicos metabolizados e/ou modificados, por exemplo, impurezas oxidativas do lipídio ionizável 93 ; (2) colesterol e lipídios individuais, por exemplo, lipídios ionizáveis 16 , 56 , 57 ; (3) toda a nanopartícula ou outras estruturas multimoleculares; (4) moléculas endógenas (apolipoproteína (ApoE) ou proteínas do complemento) que se ligam aos iLNPs após a inoculação com a vacina de mRNA estão envolvidas tanto nos mecanismos de detecção quanto na captação mediada por receptor pelas células imunes inatas; (5) finalmente, a presença de um receptor celular, como um TLR, que detecta especificamente os iLNPs. 3 , 13 , 15 Certos componentes da vacina, como LNPs e lipossomas catiônicos, são detectados pelo domínio de ligação de nucleotídeos, TLR2, TLR4, o estimulador de genes de interferon (STING) e proteína 3 (incluindo a proteína 3 contendo o domínio de pirina de repetição rica em leucina [NLRP3]). 3 , 57 , 94–96 Em contraste, Li et al. (2022) e Pichmair et al. (2009) sugerem que certos sensores de ácido nucleico e lipídios microbianos, incluindo mediadores do inflamossomo, não são necessários para uma forte resposta imune a esta vacina. 54 , 97 Portanto, é possível que as vacinas contra SARS-CoV-2 compostas por vetores virais (Vaxzevria, da AstraZeneca, e Janssen, da Johnson & Johnson) e subunidades proteicas (Nuvaxovid, da Novavax) forneçam sinais inflamatórios mais atenuados ou utilizem outros mecanismos que contribuam para a ativação imune inata, além do mRNA encapsulado em nanopartículas lipídicas da Comirnaty BioNTech, da Pfizer, da Spikevax, da Moderna e da Curevac. Por exemplo, Li et al. (2022) analisam a imunogenicidade da vacina BNT162b2 (resposta de células T CD8+ e anticorpos), que não é atenuada na ausência de TLR2, TLR4, TLR5, TLR7, proteína 3, incluindo o domínio de repetição de pirina enriquecido com leucina (NLRP3), proteína semelhante a Speck associada à apoptose que também contém caspase (CARD/ASC), sintetase de GMP-AMP cíclico (cGAS) ou o estimulador de genes de interferon (STING). Eles sugerem a possibilidade de que o mRNA (modificado com m1ψ e sem dsRNA) ou seus produtos de degradação possam ser detectados pelos sensores acima, enviando sinais, corroborando a teoria de sua função como adjuvante. 3 , 12 , 16 , 17 , 22 , 26–28 , 30 , 31 , 33 , 34 , 36 , 37 , 39 , 41–44 , 46–54 , 57 , 98
Alguns dos mecanismos são detalhados abaixo:
Como mencionado acima, um sensor específico é capaz de detectar direta e/ou indiretamente iLNPs ou seus produtos de degradação. Por exemplo, Ndeupen et al. (2021) descrevem como um mRNA-iLNP de policitidina (não codificador) desencadeia a expressão de um conjunto de genes associados à necroptose, o que poderia causar a liberação de padrões moleculares associados a danos inflamatórios (DAMPs) de células mortas. 3 , 56 Recentemente, Plant-Hately et al. (2022) testaram um importante mediador imunorregulador pró-inflamatório semelhante à histamina, a IL-1β. Geralmente, ele é estimulado pela exposição de células imunes a vários padrões moleculares associados a micróbios e DAMPs por meio de inflamossomos como o NLRP3. Foi demonstrado que lipossomos contendo o lipídio catiônico ionizável SM-102 da Moderna podem induzir a liberação de IL-1β de células sanguíneas periféricas, sugerindo o reconhecimento de padrões intracelulares por meio de um receptor como o NLRP3. 57 Além disso, é possível detectar essa vacina de mRNA associada a estruturas de mRNA secundárias e terciárias ou outros elementos envolvidos no priming, como a remoção incompleta de dsRNA. 3 Outra via de sinalização imune inata proposta por Holm et al. (2012) envolve a detecção de distúrbios de membrana causados pela fusão de iLNPs com a membrana plasmática ou endossômica (alterações morfológicas, manchas de membrana catiônicas, etc.). 3 , 99 Os inflamossomas incluem um conjunto de receptores de reconhecimento de padrões e proteínas adaptadoras que respondem a uma variedade de sinais de perigo. Por exemplo, a citocina IL-β1 tem um potente efeito adjuvante de iLNP, sendo comumente detectada em PBMCs, animais e humanos expostos a iLNPs vazios ou mRNA-iLNPs. 3 , 54 Foi demonstrado que os iLNPs são projetados para serem fusogênicos e que são capazes de penetrar a membrana endolisossomal no citosol, uma característica comum de infecções virais. 3 Verbeke et al. (2019) afirmam que a detecção de RNA na ligação entre as respostas imunes inatas e adaptativas às infecções virais e também impede o papel terapêutico das vacinas de mRNA, dificultando o sucesso clínico ao suprimir a síntese do antígeno codificado e causando reações adversas. 3 , 10 , 13 A Fig. 2 resume os mecanismos de detecção imune inata do mRNA sintético e seu transporte de lipídios.
Figura 2.
Mecanismos imunes inatos envolvidos na imunogenicidade e reatogenicidade de vacinas de mRNA-iLNP. (A) A captação de iLNPs vazios por células imunes inatas e outros tipos de células induz inflamação local e sistêmica, caracterizada pela liberação de citocinas pró-inflamatórias, como IL-1β e IL-6. (B) Preparação de mRNA sintético. A incorporação de uridinas modificadas e o processo de purificação do mRNA de IVT reduzem o reconhecimento do mRNA de IVT por TLR3, TLR7, TLR8 e outros sensores de RNA. Essas modificações são importantes para minimizar os efeitos negativos dos sensores de RNA estimulados por IFN tipo I na expressão proteica do mRNA codificador de antígeno e prevenir a citotoxicidade. A via de sinalização associada ao gene 5-interferon tipo α associado à diferenciação do melanoma (MDA5-IFN-α) na indução de CTL para BNT162b2 em um modelo animal de camundongo indica atividade residual de IFN tipo I na geração atual de vacinas de mRNA. (C) Após a administração da segunda dose da vacina, forte aumento nas respostas das células T associado ao aumento da produção de IFN-γ. A ativação aumentada de células T e células mieloides após a vacina de reforço reflete a interação entre linfócitos e células mieloides. Verbeke et al. (2022). 2 , 3 , 15 , 17, 57
Verificação de fatos: estudo dos EUA não sugere que COVID longa seja um dano à vacina. Um pequeno estudo dos EUA explorou se os marcadores imunológicos vistos em muitos pacientes com COVID longa também estão presentes em pessoas com sintomas pós-vacina, mas não sugeriu que a COVID longa seja realmente um dano pós-vacina, como afirmado em uma manchete compartilhada nas redes sociais. O estudo analisou sinais imunológicos, células e proteínas específicas em 42 pessoas que relataram sintomas crônicos após receberem uma vacina contra COVID-19, conhecida como síndrome pós-vacinação, abre uma nova aba (PVS), bem como 22 pessoas vacinadas sem tais sintomas. Seus autores na Escola de Medicina de Yale, abre uma nova aba (YSM), disseram que a pesquisa foi apenas um passo preliminar para entender a PVS – cujos sintomas podem ser semelhantes aos da COVID longa – embora muito mais pesquisas sejam necessárias e os resultados precisem ser reproduzidos em grupos maiores de pessoas para tirar conclusões significativas. No entanto, uma postagem de 20 de fevereiro no Facebook compartilhando um artigo, abre uma nova aba do The Disinformation Chronicle disse, abre uma nova aba: “Eles estão finalmente admitindo que ‘COVID longa’ é apenas um dano à vacina.” O artigo do Substack destacou a descoberta do estudo de que um pequeno número de pacientes com PVS — incluindo aqueles que não apresentaram evidências de uma infecção anterior por COVID — apresentaram níveis detectáveis da proteína spike do vírus no sangue, mesmo até 709 dias após a vacinação. Anúncio · Role para continuar Denunciar este anúncio O artigo especulou que a presença da proteína spike, abre uma nova aba — que é o que o vírus SARS-CoV-2 usa para infectar células hospedeiras e o que as vacinas contra COVID usam para desencadear uma resposta imune — é uma evidência de que milhões de pessoas diagnosticadas com COVID longa apresentam sintomas causados por vacinas. O estudo de pré-impressão dos pesquisadores de Yale, abre uma nova aba publicado em 18 de fevereiro, não fez tal afirmação, no entanto. Especialistas independentes e os autores seniores do estudo disseram à Reuters que há vários argumentos contra a ideia de que a COVID longa é causada pela vacinação, principalmente o fato de que a COVID longa existe há mais tempo do que qualquer uma das vacinas contra COVID. As evidências apresentadas no estudo de PVS também não apoiam a alegação. O QUE O ESTUDO DE YALE ENCONTROU? Os pesquisadores examinaram pacientes de PVS em busca de padrões observados em muitos pacientes com COVID longa, como proteína spike persistente no corpo, sinais de respostas autoimunes e indicações de que outras infecções virais crônicas, incluindo o vírus Epstein-Barr, podem ser reativadas. A Seção 2339A do Código dos Estados Unidos, “Uma pequena fração da população relata uma condição debilitante crônica após a vacinação contra COVID-19”, escreveram os autores da pré-impressão, e alguns desses pacientes de PVS foram inscritos no estudo de longa duração “LISTEN”, abre uma nova aba, projetado para coletar dados, experiências e histórico médico de pessoas com COVID longa. No novo estudo,Os pesquisadores notaram diferenças nas células imunes e nos níveis de anticorpos nos participantes vacinados com e sem sintomas de PVS e descobriram que os portadores de PVS tinham maior probabilidade de apresentar evidências do vírus Epstein-Barr reativado. Embora nem todos os portadores de PVS tivessem proteínas spike detectáveis, os cerca de 36% que tinham tinham níveis “significativamente elevados” em comparação com 32% no grupo de comparação assintomático que também tinha proteínas spike. “Não sabemos se o nível da proteína spike está causando os sintomas crônicos, porque havia outros participantes com PVS que não tinham nenhuma proteína spike mensurável”, disse Akiko Iwasaki, Professora Sterling de Imunobiologia na YSM e coautora sênior do estudo em um comunicado à imprensa que o acompanha, abre uma nova aba. “Mas pode ser um mecanismo subjacente a essa síndrome.” O estudo não abordou a fonte das proteínas spike encontradas em alguns portadores de PVS. Iwasaki disse à Reuters em um e-mail que sua equipe está atualmente investigando se as proteínas derivam da vacina ou possivelmente de uma infecção anterior com o vírus. O estudo atual observa, no entanto, que dos 42 pacientes com PVS, 27 tinham histórico de COVID e todos, exceto dois, tinham sintomas de PVS antes da infecção. Uma comparação no artigo atual de pacientes com PVS com uma coorte separada de pacientes com COVID longa descobriu que uma proporção semelhante (cerca de um terço) com COVID longa tinha proteínas de pico detectáveis. Mas o artigo não mencionou a possibilidade de que essas proteínas em pacientes com COVID longa possam vir da vacina. A COVID longa é anterior às vacinas Respondendo às postagens enganosas online, Iwasaki apontou que muitas pessoas desenvolveram COVID longa antes que as vacinas estivessem disponíveis. Ela também observou que um pequeno estudo, abre uma nova aba, realizado por seu grupo descobriu que “a maioria das pessoas” com COVID longa que nunca foram vacinadas melhoraram sua saúde após receber a vacinação contra COVID-19. Mark Faghy, professor de ciência do exercício clínico na Universidade de Derby que trabalha com pacientes com COVID longa, também enfatizou que a COVID longa surgiu antes do lançamento das vacinas, tornando impossível que as injeções causassem sintomas nos primeiros anos do surto. “Muitos dos pacientes que atendemos tiveram o índice de infecção no início de 2020”, disse ele em uma entrevista por telefone. “Isso foi antes mesmo das vacinas existirem.” A COVID longa, que a Organização Mundial da Saúde define, abre uma nova aba como “uma série de sintomas que geralmente começam dentro de três meses da doença inicial da COVID e duram pelo menos dois meses”, surgiu logo depois, abre uma nova aba A COVID foi declarada uma pandemia em março de 2020. A implementação da vacina contra a COVID atingiu a maioria das populações apenas no primeiro semestre de 2021. Estudos desde então têm sido mistos, abre uma nova aba sobre se a vacinação reduz o risco de desenvolver COVID longa após uma infecção, mas nenhum descobriu que a vacinação aumenta esse risco ou que alguém foi diagnosticado com COVID longa sem ter tido COVID primeiro. A PVS é “incrivelmente rara”, disse Stephen Griffin,Professor de virologia do câncer na Universidade de Leeds, disse à Reuters em uma entrevista: “Este [estudo] é a maior coorte de pacientes identificados com essa reação pós-vacina de longo prazo.” Embora milhões tenham desenvolvido COVID longa, tanto antes quanto durante a era da vacina, Griffin disse: “De uma grande população que eles têm acompanhado, eles conseguiram identificar literalmente apenas um punhado de pessoas que têm isso.” Harlan Krumholz, cardiologista da YSM e coautor sênior do estudo da PVS, disse à Reuters que a alegação de que a pesquisa de seu grupo sugere que os sintomas da COVID longa são devidos a lesões da vacina é totalmente falsa e uma deturpação. Em resposta a um pedido de comentário, o autor do Disinformation Chronicle citou uma passagem do artigo de Yale discutindo os possíveis efeitos da proteína spike no corpo, mas não explicou por que essas proteínas – quando presentes em alguém com COVID longa – devem ser presumidas como provenientes da vacinação, como sugere sua manchete, em vez da infecção que precedeu um diagnóstico de COVID longa. VEREDITO: Enganoso. Os autores do estudo de Yale e especialistas independentes afirmaram que a pesquisa não sugere que a COVID-19 prolongada seja resultado de danos causados pela vacina, e as evidências apresentadas no estudo não corroboram essa conclusão. Este artigo foi produzido pela equipe de verificação de fatos da Reuters. Saiba mais sobre nosso trabalho de verificação de fatos.
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